熒光顯微鏡是細(xì)胞生物學(xué)的基本工具。它是由光源、濾色片和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大觀察標(biāo)本的熒光圖像而實(shí)現(xiàn)對熒光樣品的定性定量研究。

激發(fā)、濾光、成像、淬滅，熒光實(shí)驗(yàn)的調(diào)整就是怎么才能協(xié)調(diào)好以上因素得到最好的效果，一個常被忽視的方面是光源的使用，熒光顯微鏡的常用光源都是白光光源：高壓汞燈和氙燈，現(xiàn)在還新出了金屬鹵素?zé)艉蚅ED。

▲麥克奧迪倒置熒光顯微鏡AE31E產(chǎn)品圖

1、汞燈

超高壓汞燈（50-200W），它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內(nèi)充一定數(shù)量的汞，工作時由兩個電極間放電，引起水銀蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當(dāng)水銀完全蒸發(fā)時，可達(dá)50～70個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力，這一過程一般約需5～15min。

超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光，足以激發(fā)各類熒光物質(zhì)，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。

一般采用德國歐司朗50W，103W，200W汞燈，適用于麥克奧迪在內(nèi)各大廠家高端熒光顯微鏡；一般200小時壽命，最長400小時。

▲MOTIC 倒置熒光顯微鏡AE31E汞燈實(shí)拍圖

2、氙燈

氙燈和汞燈做為白光源，都能提供從紫外到近紅外一系列波長的光，但它們卻有著不同的激發(fā)光譜。汞燈集中在近紫外、藍(lán)光以及綠光附近，這種在峰值的高激發(fā)能量確保產(chǎn)生明亮的熒光信號，但光毒性卻很強(qiáng)。

因此，HBO用來對固定樣品或弱熒光成像。相比而言，氙燈光源的激發(fā)比較平緩，可以用于不同波長間強(qiáng)度的比較，例如用于鈣離子濃度測量等。氙燈的強(qiáng)激發(fā)在近紅外800-1000nm。

XBO（xenon-vapor arc lamps）較HBO的特點(diǎn)：1）光譜強(qiáng)度更均勻2）在紅外及中紅外仍有較強(qiáng)光譜強(qiáng)度3）能量較強(qiáng)更易到達(dá)物鏡后孔徑

XBO75W，100W氙燈；壽命一般400小時，1200小時

3、金屬鹵素?zé)?

這是近年來出現(xiàn)的一種光源，它和汞燈的激發(fā)光譜很像，但它和顯微鏡以光纖相連，能散熱，壽命更長。光纖從光源連到熒光顯微鏡上，可以大量減少光產(chǎn)生的熱能。金屬鹵素?zé)魧罴?xì)胞成像的另一個優(yōu)勢是內(nèi)置強(qiáng)度設(shè)計(jì)裝置，可以容易調(diào)節(jié)激發(fā)光。

▲高端熒光顯微鏡用金屬鹵素?zé)粼串a(chǎn)品圖