光學(xué)顯微鏡數(shù)碼成像效果，影響清晰度的因素很多，如：調(diào)焦的準(zhǔn)確性、視力屈光度的校正、標(biāo)本的質(zhì)量、光線的弱、物鏡的質(zhì)量和感光片的解像率等。但是，還有一個影響清晰度的重要因素一一光鏡光闌的孔徑大小調(diào)節(jié)卻往往被人們忽視了．使拍出的顯微照片時而清晰，時而模糊，而不知道原因在哪里。
其實造成這種情況的原因是沒有真正理解聚光鏡孔徑光闌在顯微攝影中的全部功能。因為人們往往把影響光學(xué)顯微攝影清晰度的因素只歸結(jié)為調(diào)焦、屈光度、標(biāo)本質(zhì)量、感光片分辨率和光線強弱等基本操作環(huán)節(jié)，而沒有重視甚至根本沒有考慮到聚光鏡孔徑光闌大小對拍攝清晰度的影響。實際上聚光鏡孔徑光闌的作用不只是控制顯微攝影光源的亮度，同時還具有控制所攝標(biāo)本“景深”范圍的功能。而正是因為人們忽視了這一點，當(dāng)我們從高倍鏡轉(zhuǎn)向低倍鏡拍攝時，常常沒有按要求及時縮小聚光鏡的光闌孔徑至低倍鏡所需孔徑參數(shù)，至使低倍視野的景深不夠，從而造成低倍物鏡所攝照片清晰度較低的現(xiàn)象。

在使用不同放大倍率的物鏡（如低倍、高倍和油鏡）時，需要整聚光鏡光闌的大小，以譴節(jié)視野光線照度，使視野的高度達到適合拍攝的要求。如，油鏡的訕光量很小，使用汕拍攝時需廾大聚光鏡光闌，以提高視野的照度；低鏡通光量較大，需縮小光闌，以降低視野的照度。但是，聚鏡光的孔徑大小小僅直接影響顯微視野的通光量，而還會直接影響拍扭照片的清晰度，所以，顯微攝影僅的聚光光闌的大小不僅會影到向顯微視野的亮度，同時也會影響顯微視野的“景深”縱深清晰范圍。

因此，當(dāng)聚光鏡孔徑光闌開大時，顯微視通光量大，景深較?。ㄒ曇扒逦炔粔颍划?dāng)聚光鏡孔徑光闌縮小時，顯微視通光量小，而景深變大（表現(xiàn)為視野清晰度明顯提高）。

弄清楚了顯微鏡中聚光鏡光闌的作用后，我們就不難看出，須隨時根據(jù)不同放大倍率物鏡的轉(zhuǎn)換（如從高信鏡轉(zhuǎn)換為低倍鏡),而改變聚光鏡光闌的孔徑大小，以能保正視野亮度，又能保正有“景深"（清晰度）。

聚光鏡孔徑光闌百徑數(shù)的設(shè)置在專業(yè)書藉中都有記，見表1（第一行中相關(guān)豢數(shù)但筆者在實踐中發(fā)現(xiàn)書中介紹的光闌孔徑數(shù)值參數(shù)偏于保守，還可以將孔徑標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)設(shè)置小一點，以求取得更大的清晰度。

于是，筆者根據(jù)顯微物鏡放大倍率與聚光鏡孔徑光闌的關(guān)系設(shè)計了一實驗方案，摸索出顯微攝影中．孔徑光闌直徑參數(shù)設(shè)置的最佳方案。

這一實驗方案選擇了低倍、高倍和油鏡作為實驗對象，并分別選用三種不同直徑的聚光鏡孔徑光闌進行實拍對比實驗。實驗結(jié)果見取1中第二行中相關(guān)參數(shù)。而顯微物鏡與聚光鏡光闌不同孔徑參數(shù)分組設(shè)置的實驗拍扌聶方法及結(jié)果見表2。

因此，如果用人于發(fā)倍的目鏡拍攝，聚光鏡的光匍孔徑最好使用表1中的“書中介紹的孔徑光闌直徑”一欄的參數(shù)，這會損失些清晰度，但可避免出現(xiàn)很梧糕的黑。建議最好使4倍以下的低倍目馇，并適當(dāng)縮小聚光鏡孔徑光闌。
從中可看出；《用低倍物鏡拍攝時需要將聚光鏡的孔徑光直徑縮小至0、2～巧之間“用高倍物鏡拍攝[扌需要將聚光鏡的孔釋光闌直徑縮小至0．56一0．0用油鏡拍攝時需要聚光鏡的孔徑光闌百徑廾大至1一工卜之間。@如果聚光鏡孔徑光闌直徑過小，所拍攝照片雖然沽晰，但是照片上可能會出了光暈?zāi)?，一般?xì)胞散在的涂片標(biāo)本透光強，更容易產(chǎn)生光暈，需適當(dāng)廾大些聚光鏡孔徑光闌。
從表2的實驗結(jié)果可以看出：光學(xué)顯微攝影屮物鏡放大倍率與聚光鏡孔徑光闌的參數(shù)值配合，應(yīng)該比書介紹的參數(shù)值略小為好，見表1中第2行。

但是，也不能因追求大景深高清晰度向過多縮小聚光鏡孔徑光，從血造成在顯微攝影照片屮出現(xiàn)光風(fēng)．黑影。
從理論上講，小管使用低倍、高倍或油鏡，聚光鏡的孔徑光闌的參越?。纯讖皆叫。臄z硯野的景深就越大，所拍照片的清晰度就越高，但在使川小同放大倍率的物拍攝時，聚光鏡的孔徑光闌也不是越小越好。例如，在用油鏡時，物鏡通光量很小，適當(dāng)開大孔徑光闌，曝光時間會達1至數(shù)分鐘，甚至幾十分鐘，膠片會因過長的曝光造成曝光失誤。此外，光闌孔徑過小，在所攝畫中會出現(xiàn)光暈，使拍攝的照片無法使用。
所以，我們在選擇顯微攝影儀的孔徑光闌直徑大小時，要兼顧顯微視野的“亮度"和“景深”范圍兩者需要，取其折衷參數(shù)值。